Системата RPA-CRISPR/Cas12a в това проучване постига бързо (30–40 минути), ултра-чувствително (1 копие/μL) HCMV откриване чрез насочване към ранно-експресирания UL123 ген, превъзхождайки конвенционалните методи при тестване на клинични проби. Това нововъведение позволява навременна диагностика на инфекции с ниско-вирусно-натоварване, особено при имунокомпрометирани пациенти и подчертава осъществимостта на CRISPR-диагностика за подобряване на управлението на заболявания, свързани с HCMV-. Опростеността и ефективността на анализа подчертават потенциала му като-инструмент за-грижа за-ограничени ресурси.
Модели на места за усилване на RPA и избор на комплект.
(A) Дизайн на RPA праймер по отношение на местоположението на фрагментите за усилване. Стрелките показват базовите позиции от началото до края на амплифицирания фрагмент с праймерите P1-P6.
(B) Изображението от електрофореза в агарозен гел на продукта RPA, амплифициран с 6 комплекта праймери HCMV.
(C) Проверка на ефективността на усилване на RPA комплекти от различни компании. P: Праймер, NC: Отрицателна контрола.
Резултатите показват, че комплектът AmpFuture показва най-висока ефективност на усилване.
Сравнение на положителните проценти на MIRA-CRISPR/Cas12a, PCR - метод на флуоресцентна сонда и qPCR в клинични проби.
Взехме проби от кръв и урина от 48 клинични пациенти. Геномна ДНК беше извлечена от тези проби с помощта на TIANamp Genomic DNA Kit и резултатите от откриването на UL122 бяха анализирани чрез метода на PCR-флуоресцентна сонда. Сравнявайки нашите резултати с клиничните диагнози, нашите методи идентифицираха 6 положителни проби, които бяха отрицателни при клиничните тестове.
