Йо! Аз съм доставчик на комплекти за изотермификация на РНК и днес искам да си поговоря за осъществимостта на използването на тези комплекти за еднократна амплификация на РНК.
Първо, нека разберем какво представлява усилването на едноклетъчната РНК. Единично -клетъчната РНК секвениране (ScrNA - SEQ) се превърна в игра - смяна в биологичните изследвания. Тя ни позволява да изследваме моделите на генна експресия на отделни клетки, което е супер важно, тъй като клетките в тъкан не са еднакви. Може да има много хетерогенност и ScrNA - SEQ ни помага да надникнем в тези разлики на едно -клетъчно ниво. Но ето улова: количеството РНК в една клетка е изключително мъничко. Говорим за нивата на пикограма. И за повечето техники за анализ надолу по веригата се нуждаем от много по -голямо количество РНК. Именно там идва усилването.
И така, какво ще кажете да използваме нашите комплекти за изотермично усилване на РНК за тази задача? Е, нека да се разровим в плюсовете и минусите.
Предимства
1. Простота
Едно от най -големите предимства на изотермичното усилване е неговата простота. За разлика от традиционния PCR, който изисква термичен циклич да преминава през различни температурни цикли (денатурация, отгряване и удължаване), изотермичното усилване се случва при постоянна температура. Това означава, че не се нуждаете от фантазия и скъп термичен цикъл. Можете да извършите реакцията на усилване в обикновен топлинен блок или дори водна баня. За изследователи, които извършват еднократна амплификация на РНК на бюджет или в по -малко оборудвана лаборатория, това е огромен плюс.
2. Скорост
Изотермичното усилване обикновено е доста бързо. Той може да генерира голямо количество амплифицирана РНК за сравнително кратък период. Когато се занимавате с единични клетъчни проби, времето е от съществено значение. Не искате да чакате с часове, за да завърши усилването. НашитеMira RNA изотермичен комплект за бързо амплификация BASIC - IIе проектиран да ви даде бързи резултати, така че можете да преминете към следващата стъпка от вашия експеримент, без да губите прекалено много време.
3. Чувствителност
Тези комплекти са силно чувствителни. Те могат да открият и амплифицират дори ниско изобилие РНК транскриптите в единични клетки. При единичен клетъчен анализ често има редки стенограми, които са от решаващо значение за разбирането на функцията и развитието на клетките. Нашите комплекти за изотермично усилване могат да вземат тези редки преписи и да ги усилят, което ви позволява да получите по -изчерпателен поглед върху профила на генната експресия в една клетка.
4. Съвместимост
Изотермичното усилване е съвместимо с широк спектър от приложения надолу по веригата. Независимо дали искате да направите секвениране на РНК, qPCR или други методи за анализ, може да се използва амплифицираната РНК от нашите комплекти. Тази гъвкавост е страхотна, защото ви позволява да изберете метода за анализ, който най -добре отговаря на вашия изследователски въпрос.
Недостатъци
1. Пристрастия
Един от основните недостатъци на всеки метод на усилване е пристрастието. Изотермичното усилване не е изключение. Различните РНК стенограми могат да бъдат амплифицирани с различни скорости, което може да доведе до неточно представяне на първоначалната популация на РНК в единичната клетка. Това пристрастие може да повлияе на резултатите от анализа надолу по веригата, което затруднява точното количествено определяне на нивата на генна експресия. Нашият екип за научноизследователска и развойна дейност обаче работи усилено, за да сведе до минимум това пристрастие в нашитеMIRA РНК Изотермичен комплект за бързо амплификация Нуклеинова киселина Тестова лента. Оптимизирахме реакционните условия и ензимните състави, за да направим амплификацията възможно най -безпристрастно.
2. Риск за замърсяване
Тъй като изотермичното усилване може да генерира голямо количество усилен продукт, има по -висок риск от замърсяване. Дори малко количество замърсяваща РНК или ДНК може да бъде амплифицирано и да се покаже във вашите резултати. Това може да доведе до фалшиви позитиви и неточни данни. За да се намали този риск, важно е да следвате строги лабораторни протоколи, като например използване на специални пипети, работа в чиста качулка и използване на правилни методи за обеззаразяване.
Осъществимост в различни изследователски сценарии
1. Биология на развитието
В биологията на развитието разбирането на това как клетките се различават и развиват е от решаващо значение. Едно - клетъчната РНК амплификация може да помогне на изследователите да идентифицират ключовите гени и сигналните пътища, участващи в тези процеси. Нашите комплекти за изотермификация на РНК могат да бъдат много полезни тук. Например, когато изучавате ранното развитие на ембрион, единично -клетъчен анализ може да разкрие промените в генната експресия, които се появяват, когато клетките започват да се специализират. Простотата и скоростта на нашите комплекти позволяват на изследователите бързо да усилват РНК от тези ценни единични клетъчни проби и да започнат да анализират данните.
2. Изследване на рака
Ракът е сложно заболяване, а единичната клетъчна РНК анализ може да даде представа за хетерогенността на туморните клетки. Различните клетки в рамките на тумор могат да имат различни профили на генна експресия, които могат да повлияят на тяхното поведение, като метастази и резистентност към лекарства. Нашите комплекти могат да бъдат използвани за амплифициране на РНК от единични ракови клетки, което позволява на изследователите да изследват тези разлики на молекулно ниво. Високата чувствителност на нашите комплекти може да открие редки стенограми, които могат да бъдат свързани с прогресия на рака или отговор на лекарството.
3. Имунология
В имунологията единично -клетъчната РНК анализ може да помогне за разбирането на функцията на различни подмножества на имунните клетки. Например, Т клетките могат да имат различни подтипове, всеки с уникален модел на генна експресия. Нашите комплекти за изотермификация на РНК могат да се използват за амплифициране на РНК от единични Т клетки, което позволява на изследователите да изследват промените в генната експресия, които се появяват по време на имунен отговор.
Контрол на качеството
Когато използваме нашите комплекти за изотермификация на РНК за амплификация на едно -клетъчна РНК, контролът на качеството е от съществено значение. Винаги трябва да управлявате отрицателен контрол, за да проверите за замърсяване. Също така, добра идея е да използвате Spike - в контролите на РНК. Това са известни РНК последователности, които добавяте към вашите единични клетъчни проби при известна концентрация. Сравнявайки резултатите от амплификацията на скока - в контролите с действителната единична клетъчна РНК, можете да оцените ефективността и отклонението на реакцията на амплификация.
В допълнение, можете да използвате гел електрофореза или капилярна електрофореза, за да проверите разпределението на размера на амплифицираната РНК. Добрият резултат от усилване трябва да показва сравнително широк диапазон от размери на РНК, което показва, че са усилени различни стенограми.
Заключение
В заключение, използването на нашите комплекти за изотермификация на РНК за едно -клетъчна РНК амплификация определено е възможно. Въпреки че има някои предизвикателства, като пристрастия и риск от замърсяване, предимствата на простотата, скоростта, чувствителността и съвместимостта ги правят чудесен вариант за много изследователски сценарии. Независимо дали сте в основна изследователска лаборатория или клинична изследователска настройка, нашите комплекти могат да ви помогнат да извлечете максимума от вашите едноклетъчни РНК проби.
Ако се интересувате да научите повече за нашите комплекти за изотермично усилване на РНК или имате въпроси относно използването им за амплификация на едно -клетъчна РНК, не се колебайте да достигнете. Винаги сме щастливи, че разговаряме и ще ви помогнем с вашите изследователски нужди. И ако сте готови да направите покупка, ние сме тук, за да улесним процеса на обществени поръчки. Можете да изследвате нашата продуктова гама, включителноMira ДНК изотермичен комплект за бързо усилване, на нашия уебсайт и започнете пътуването си в единична клетъчна РНК анализ.
ЛИТЕРАТУРА
- Tang, F., Barbacioru, C., Wang, Y., Nordman, E., Lee, C., Xu, N.,… & Surani, MA (2009). mRNA - SEQ Whole - Transcriptome Analysis на една клетка. Методи на природата, 6 (5), 377 - 382.
- Van Dijk, DF, Nanys, J., Guo, G., Sharma, R., Khodosevich, K., Adonis, X., ... & Van Oudenaarden, A. (2018). Десет години едноклетъчна RNNA секвениране. Nature Communications, 9 (1), 1 -
- Chen, F., & Macosko, EZ (2019). Единични технологии за секвениране на клетъчна РНК и биоинформатични тръбопроводи. Природни протоколи, 14 (4), 1 202 - 1 226.