Тук установяваме sCRAM (субоптимален протоспейсър съседен мотив (PAM)-медиирана CRISPR РНК и Cas12a нуклеаза, комбинирана с многоензимна изотермична бърза амплификация), бърза диагностична платформа-без екстракция, която открива ASFV в рамките на 20 минути. sCRAM интегрира етап на бързо освобождаване на нуклеинова киселина (40 градуса, 5 минути) с реакция в една -епруветка, комбинираща мултиензимна изотермична амплификация (MIRA) и неоптимален PAM-медииран CRISPR/
Система Cas12a (37 градуса, 15 минути), позволяваща -визуално отчитане без инструмент чрез UV светлина или ленти за страничен поток (LFS).sCRAM демонстрира чувствителност при откриване на едно-копие и не проявява кръстосана{6}}реактивност с пет често срещани патогена по свинете (PRRSV, PPV, JEV, PCV и PRV). Оценката на 111 симулирани и клинични проби (включително кръв, плазма и тампони) разкрива 100% съответствие с qPCR за UV отчитане и 98,20% за LFS
отчитане, като и двата метода показват 100% специфичност. Простотата, скоростта и адаптивността на място на sCRAM подчертават потенциала му за децентрализирано наблюдение на ASFV в-ограничени настройки, предлагайки мощен инструмент за ограничаване на епидемията.
В това проучване разработихме sCRAM, бърза и{0}}разполагаема на място платформа за откриване на ASFV, интегрираща неоптимален PAM-медииран CRISPR/Cas12a с мултиензимно изотермично усилване. Анализът постига чувствителност на едно-копие 1 копие/uL в рамките на 20 минути и не показва кръстосана-реактивност с основните патогени по свинете. Клиничното валидиране на проби от кръв, плазма и тампони демонстрира пълно съответствие с qPCR с помощта на отчитане на UV светлина и 98,20 % точност чрез ленти за страничен поток. С опростена работа, висока чувствителност и специфичност и интерпретация на визуални резултати, sCRAM предлага силен потенциал за-наблюдение на ASFV на място и по-широки-на-диагностични приложения.
