Мащабирането на реакцията на изотермификация на РНК е решаващ процес за много приложения в молекулярната биология, диагностиката и биотехнологиите. Като водещ доставчик на комплекти за изотермично усилване на РНК, ние разбираме предизвикателствата и изискванията, свързани с тази задача. В тази публикация в блога ще обсъдим ключовите съображения и стратегии за успешно мащабиране на реакциите на изотермификация на РНК.
Разбиране на изотермичното усилване на РНК
Изотермичното усилване на РНК е мощна техника, която позволява бързо и ефективно усилване на целите на РНК при постоянни температурни условия. За разлика от традиционната полимеразна верижна реакция (PCR), която изисква термично колоездене, изотермичните методи за усилване предлагат няколко предимства, включително простота, скорост и съвместимост с приложения за грижа.
Има няколко типа методи за изотермификация на РНК, като последователност на нуклеинова киселина - базирана амплификация (NASBA), рекомбиназна - подпомагана амплификация (RAA) и медиирана от контура изотермична амплификация (LAMP). Всеки метод има свой уникален механизъм и характеристики, но всички те споделят общата цел за усилване на РНК за сравнително кратък период от време.
Основни съображения за мащабиране
Качество и количество на реагента
При мащабиране на реакция на изотермификация на РНК, качеството и количеството на реагентите са от изключително значение. Висококачествените ензими, праймери и други реакционни компоненти са от съществено значение за последователно и надеждно усилване. Като доставчик на изотермични комплекти за амплификация на РНК, ние гарантираме, че всички наши реагенти са внимателно произведени и качествени - контролирани, за да отговарят на най -високите стандарти.
Количеството реагенти също трябва да се регулира пропорционално при мащабиране на реакцията. Например, ако увеличавате обема на реакцията от 20 μl до 100 μl, трябва да увеличите количеството на всеки реагент с коефициент 5. Въпреки това е важно да се отбележи, че някои реагенти, като ензими, могат да имат оптимални концентрации, които не трябва да бъдат превишени, за да се избегнат потенциални инхибиторни ефекти.
Обем на реакцията и смесване
Увеличаването на обема на реакцията може да окаже значително влияние върху ефективността на усилване. По -големите обеми на реакция могат да изискват по -задълбочено смесване, за да се осигури равномерно разпределение на реагентите и целевата РНК. Правилното смесване може да се постигне чрез нежно пипетиране, вихър или използване на миксер. Въпреки това, трябва да се избягва прекомерното смесване, тъй като може да причини увреждане на нуклеиновите киселини или денатурирането на ензимите.
Препоръчваме да използвате добре калибрирани пипети и устройства за смесване, за да се осигурят точни и възпроизводими резултати. Освен това, когато мащабирате реакцията, е препоръчително първо да се извършват пилотни експерименти с малки мащаби, за да се оптимизират реакционните условия и да се определят подходящите параметри на смесване.
Контрол на температурата
Поддържането на постоянна и точна температура е от решаващо значение за успешното изотермично усилване на РНК. Повечето изотермични методи за усилване работят в специфичен температурен диапазон, обикновено между 37 ° С и 65 ° С. При мащабиране на реакцията е от съществено значение да се използва надеждно устройство за отопление, което може да поддържа желаната температура през целия процес на усилване.
Нашите комплекти за изотермично усилване на РНК са проектирани да работят оптимално в определен температурен диапазон и ние предоставяме подробни инструкции за контрол на температурата в нашите ръководства за продукти. Използването на термичен цикъл или нагревателен блок с прецизен контрол на температурата може да помогне за осигуряване на последователно и ефективно усилване.
Предотвратяване на замърсяване
Замърсяването е основен проблем при всяка реакция на усилване на нуклеиновата киселина, особено при мащабиране. За да се предотврати замърсяването, е важно да следвате строги лабораторни протоколи, като например използване на специални пипети, носене на ръкавици и работа в чиста среда. Освен това, използването на пипети с положително изместване може да помогне за намаляване на риска от аерозолно замърсяване.
Нашите комплекти са снабдени с всички необходими реагенти във формат готов - да използват формат, който свежда до минимум риска от замърсяване по време на подготовката на реагентите. Също така препоръчваме да използвате отрицателни контроли във всеки експеримент, за да наблюдавате всяко потенциално замърсяване.
Стратегии за мащабиране
Постепенно мащабиране
Една от най -ефективните стратегии за мащабиране на реакциите на изотермификация на РНК е да го направите постепенно. Започнете с увеличаване на обема на реакцията с малък фактор, като 2 - 3 пъти, и оптимизирайте реакционните условия на всеки етап. Този подход ви позволява да идентифицирате и адресирате всички проблеми, които могат да възникнат по време на процеса на мащабиране, като промени в ефективността на усилване или появата на не -специфични продукти.
След успешно мащабиране до умерен обем, постепенно можете да увеличите обема допълнително, докато не достигнете желаната скала. Тази стъпка - чрез - стъпков подход помага да се гарантира, че реакцията остава здрава и надеждна през целия процес на мащабиране.
Паралелни реакции
Друга стратегия за мащабиране е извършване на множество паралелни реакции. Вместо да увеличите обема на една реакция, можете да стартирате няколко по -малки реакции едновременно. Този подход има няколко предимства, включително намален риск от замърсяване, по -лесно боравене и способност за наблюдение на всяка реакция независимо.
След като паралелните реакции приключат, усилените продукти могат да се обединят, ако е необходимо. Важно е обаче да се отбележи, че изпълнението на паралелни реакции може да изисква повече реагенти и оборудване, така че е необходимо внимателно планиране.
Нашите комплекти за изотермификация на РНК
Като доставчик на изотермични комплекти за усилване на РНК, ние предлагаме гама от висококачествени продукти, които са проектирани да отговарят на разнообразните нужди на нашите клиенти. Нашите комплекти са лесни за използване, надеждни и дават бързи резултати.
Предлагаме и свързани продукти катоMIRA ДНК Изотермичен комплект за бързо амплификация Нуклеинова киселина Тест лента,MIRA ДНК Изотермичен комплект за бързо амплификация флуоресценцияиMira ДНК изотермичен комплект за бързо усилване. Тези комплекти са подходящи за различни приложения, включително откриване на патоген, анализ на експресия на ген и тестване на точките.
Заключение
Мащабирането на реакциите на изотермификация на РНК изисква внимателно разглеждане на няколко фактора, включително качеството на реагентите, обема на реакцията, контрол на температурата и предотвратяване на замърсяване. Следвайки ключовите съображения и стратегии, очертани в тази публикация в блога, можете успешно да мащабирате реакциите си на изотермична амплификация на РНК и да постигнете надеждни и възпроизводими резултати.
Ако се интересувате от закупуване на нашите комплекти за изотермично усилване на РНК или имате въпроси относно мащабирането на вашите реакции, моля, не се колебайте да се свържете с нас за по -нататъшно обсъждане и договаряне на поръчки. Ние се ангажираме да ви предоставим най -добрите продукти и техническа поддръжка, за да отговорим на вашите изследователски нужди.
ЛИТЕРАТУРА
- Notomi T, Okyama H, Masubuchi H, et al. Цикъл - медиирана изотермична амплификация на ДНК. Нуклеинови киселини Res. 2000; 28 (12): E63.
- Compton J. Последователност на нуклеинова киселина - базирана амплификация. Природа. 1991; 350 (6313): 91 - 92.
- Piepenburg O, Williams CH, Stemple DL, Armes Na. ДНК откриване с помощта на рекомбинационни протеини. PLOS BIOL. 2006; 4 (7): E204.