Появата и разпространението на различни вируси винаги са били значителна заплаха за глобалното обществено здраве. Ефективните методи за откриване на вируси са от решаващо значение за навременна превенция, контрол и лечение. През последните години технологията за изотермална амплификация на РНК се очертава като мощен инструмент в областта на откриването на вируси. Като доставчик на комплекти за изотермификация на РНК, често ме питат дали тези комплекти могат да се използват за откриване на вирусна РНК. В този блог ще се задълбоча в този въпрос, изследвайки принципите, предимствата, ограниченията и практическите приложения на комплектите за изотермично усилване на РНК при откриване на вирусна РНК.
Принципи на изотермичното усилване на РНК
Изотермичната амплификация на РНК е техника, която позволява усилване на специфични РНК последователности при постоянна температура, за разлика от традиционната верижна реакция на полимераза (PCR), която изисква циклични температурни промени. Има няколко вида методи за изотермификация на РНК, като медиирана изотермична амплификация (LAMP), амплификация на базата на нуклеинова киселина - базирана (NASBA) и рекомбиназна полимеразна амплификация (RPA).
Лампата използва набор от четири до шест праймера, които разпознават шест до осем различни области на целевата РНК. ДНК полимераза на нишката - изместване се използва за синтезиране на ДНК от шаблона на РНК след обратна транскрипция. Реакцията може да продължи при постоянна температура (обикновено около 60 - 65 ° С), а продуктите за усилване образуват характерни контурни структури, които могат да бъдат открити чрез мътност, флуоресценция или промяна на цвета.
NASBA е метод, който комбинира обратната транскрипция, храносмилането на RNase H и ДНК -зависимата РНК полимераза. Той може конкретно да усили целите на РНК при постоянна температура (обикновено 41 ° С). Реакцията генерира голямо количество ампликони на РНК, които могат да бъдат открити с различни средства, включително анализи, базирани на хибридизация.
RPA се основава на способността на рекомбиназите да сдвояват олигонуклеотидни праймери с хомоложни последователности в двойно -обратена ДНК. След като праймерите са свързани към целевата ДНК (обратна - транскрибирана от РНК), ДНК полимераза удължава праймерите, което води до амплификация на целевата последователност при постоянна температура (обикновено около 37 ° С).
Предимства на комплектите за изотермична амплификация на РНК за откриване на вирусна РНК за откриване на РНК
1. Простота и скорост
Едно от най -значимите предимства на комплектите за изотермификация на РНК е тяхната простота. За разлика от PCR, който изисква термичен цикъл за промяна на температурите, може да се извърши изотермично усилване с помощта на обикновен нагревателен блок или водна баня. Това прави оборудването по -достъпно, особено в ограничените настройки на ресурсите. Например, в селските райони или развиващите се страни, където достъпът до скъпо лабораторно оборудване е ограничен, изотермичните комплекти за усилване могат да бъдат игра - смяна.
Скоростта на изотермично усилване също е забележителна. Някои реакции на изотермична амплификация могат да бъдат завършени в рамките на 15 - 60 минути, много по -бързи от традиционния PCR, което обикновено отнема няколко часа. Това бързо време за обрат е от решаващо значение за навременната диагностика и реакцията при огнища на вируси.
2. Чувствителност и специфичност
Изотермичните комплекти за амплификация на РНК могат да постигнат висока чувствителност и специфичност. Дизайнът на праймери в тези комплекти е внимателно оптимизиран, за да се насочи към специфични региони на вирусната РНК. Например в LAMP използването на множество праймери увеличава специфичността на реакцията. В същото време ефективността на амплификация на тези методи е висока, което позволява откриването на малък брой вирусна РНК молекули.
3. Универсалност
Изотермичните комплекти за амплификация на РНК могат да се използват за откриване на широк спектър от вируси, включително грипни вируси, коронавируси, вируси на хепатит и вируси на денга. Те могат да се прилагат при различни видове проби, като кръв, слюнка, носни тампони и урина. Тази гъвкавост ги прави ценен инструмент в различни области, включително клинична диагноза, епидемиологично наблюдение и тестване за безопасност на храните.
Ограничения на комплектите за изотермификация на РНК за откриване на вирусна РНК откриване
1. Предизвикателства за дизайна на грунд
Проектирането на праймери за изотермална амплификация може да бъде по -предизвикателно, отколкото за PCR. Тъй като изотермичните методи за амплификация разчитат на множество праймери, разпознаващи специфични региони на целевата РНК, праймерите трябва да бъдат внимателно проектирани, за да избегнат не -специфична амплификация и образуване на димер. Това изисква дълбоко разбиране на целевата последователност на вируса и механизма за усилване.
2. Грешно - положителни и невярни - отрицателни резултати
Въпреки че изотермичните методи за усилване обикновено са чувствителни и специфични, фалшиви - положителни и фалшиви - отрицателни резултати все още могат да се появят. Грешно - Положителните резултати могат да бъдат причинени от замърсяване по време на процеса на подготовка или усилване на пробата. FALSE - Отрицателните резултати могат да се дължат на наличието на инхибитори в пробата, ниско натоварване на вируса или неправилен дизайн на грунд.
3. Ограничена възможност за мултиплексиране
В сравнение с PCR, изотермичните методи за усилване имат ограничена възможност за мултиплексиране. По -трудно е да се проектират множество грундирани набори за различни вирусни цели в една реакция, тъй като праймерите могат да пречат помежду си, което води до намалена ефективност на амплификация или не -специфично усилване.
Практически приложения на комплекти за изотермична амплификация на РНК при откриване на вирусна РНК
1. Точка - от - тестване на грижи (POCT)
Изотермичните комплекти за амплификация на РНК са подходящи за POCT. Тяхната простота и скорост ги правят идеални за употреба в клиники, лекарски кабинети и дори на полето. Например, в случай на откриване на грип вирус, бързата и точна диагноза в момента на грижите може да помогне на лекарите да вземат навременни решения за лечение и да предотвратят разпространението на вируса.
2. Епидемиологично наблюдение
В големи мащабни епидемиологични наблюдения могат да се използват изотермични комплекти за амплификация на РНК за бързо скрининг на голям брой проби. Например, по време на коронавирусна епидемия, тези комплекти могат да се използват за тестване на голям брой индивиди за кратък период, което е от решаващо значение за разбиране на разпространението на вируса и формулиране на подходящи мерки за контрол.
3. Изследвания и разработки
В областта на изследванията на вирусологията, комплектите за изотермично амплификация на РНК са ценни инструменти за изучаване на вирусни геноми, генна експресия и вирус - гостоприемни взаимодействия. Те могат да се използват за откриване и количествено определяне на вирусната РНК в клетъчните култури, животински модели и клинични проби, предоставящи важна информация за развитието на ваксината и антивирусните изследвания на лекарствата.
Нашите комплекти за изотермификация на РНК
Като доставчик ние предлагаме гама от висококачествени комплекти за изотермификация на РНК, катоMIRA РНК Изотермичен комплект за бързо амплификация Нуклеинова киселина Тестова лента,Mira ДНК изотермичен комплект за бързо усилванеиMira RNA изотермичен комплект за бързо амплификация BASIC - II. Тези комплекти са проектирани с висококачествени реагенти и оптимизирани грундира, за да се гарантира висока чувствителност, специфичност и възпроизводимост. Те са лесни за използване и могат да бъдат персонализирани според различните нужди на клиентите.
Заключение
В заключение, изотермичните комплекти за амплификация на РНК наистина могат да се използват за откриване на вирусна РНК. Те предлагат няколко предимства, включително простота, скорост, чувствителност и гъвкавост, които ги правят подходящи за широк спектър от приложения, от тестване на точка - на тестване на грижи до епидемиологично наблюдение на големи мащаби. Те обаче имат и някои ограничения, като предизвикателства за дизайн на грунд и ограничена способност за мултиплексиране.
Ако се интересувате от нашите комплекти за изотермично усилване на РНК за откриване на вирусна РНК или имате въпроси относно тяхното приложение, моля не се колебайте да се свържете с нас за поръчки и по -нататъшни дискусии. Ние се ангажираме да ви предоставим най -добрите продукти и техническа поддръжка.
ЛИТЕРАТУРА
- Notomi, T., Okyama, H., Masubuchi, H., Yonekawa, T., Watanabe, K., Amino, N., & Hase, T. (2000). Цикъл - медиирана изотермична амплификация на ДНК. Изследване на нуклеинови киселини, 28 (12), E63 - E63.
- Compton, J. (1991). Последователност на нуклеинова киселина - усилване на базата на базата на. Природа, 350 (6313), 91 - 92.
- Piepenburg, O., Williams, Ch, Stemple, DL, & Armes, Na (2006). ДНК откриване с помощта на рекомбинационни протеини. PLOS BIOLOGY, 4 (7), E204.